කෙටි විස්තරය:
2.1. SDE සකස් කිරීම
SD හි ඉඟුරු, කොරියාවේ ගුරි හි හැන්හර්බ් සමාගමෙන් වියළි ඔසුවක් ලෙස මිලදී ගන්නා ලදී. කොරියානු පෙරදිග වෛද්ය ආයතනයේ (KIOM) වෛද්ය ගෝ-යා චෝයි විසින් ශාක ද්රව්ය වර්ගීකරණයෙන් තහවුරු කරන ලදී. වවුචර් නිදර්ශකයක් (අංකය 2014 SDE-6) සම්මත ඖෂධ සම්පත් පිළිබඳ කොරියානු ශාකාගාරයේ තැන්පත් කරන ලදී. SD (320 g) වියළි ඉඟුරු 70% එතනෝල් (පැය 2 ක ප්රත්යාවර්තයක් සමඟ) සමඟ දෙවරක් නිස්සාරණය කරන ලද අතර පසුව සාරය අඩු පීඩනයක් යටතේ සාන්ද්රණය කරන ලදී. කසාය පෙරීම, ලයොෆිලීකරණය සහ 4°C හි ගබඩා කරන ලදී. අමු ආරම්භක ද්රව්ය වලින් වියළි සාරයේ අස්වැන්න 48.13% (w/w) විය.
2.2. ප්රමාණාත්මක ඉහළ කාර්ය සාධන ද්රව වර්ණදේහ (HPLC) විශ්ලේෂණය
වර්ණලේඛන විශ්ලේෂණය HPLC පද්ධතියක් (වෝටර්ස් සමාගම, මිල්ෆර්ඩ්, MA, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) සහ ෆොටෝඩයෝඩ අරා අනාවරකයක් සමඟ සිදු කරන ලදී. SDE හි HPLC විශ්ලේෂණය සඳහා, ප්රාථමික-O-ග්ලූකෝසයිල්සිමිෆුජින් ප්රමිතිය කොරියානු සාම්ප්රදායික වෛද්ය කර්මාන්ත ප්රවර්ධන ආයතනයෙන් (ජියොංසාන්, කොරියාව) මිලදී ගන්නා ලදී, සහතත්පර-O-ග්ලූකෝසිල්හමවුඩෝල් සහ 4′-O-β-ඩී-ග්ලූකෝසිල්-5-O-මෙතිල්විසැමිනෝල් අපගේ රසායනාගාරය තුළ හුදකලා කරන ලද අතර වර්ණාවලි විශ්ලේෂණයන් මගින් හඳුනා ගන්නා ලදී, ප්රධාන වශයෙන් NMR සහ MS මගින්.
SDE සාම්පල (0.1 mg) 70% එතනෝල් (10 mL) තුළ දිය කරන ලදී. XSelect HSS T3 C18 තීරුවක් (4.6 × 250 mm, 5) සමඟ වර්ණදේහ වෙන් කිරීම සිදු කරන ලදී.μm, වෝටර්ස් සමාගම, මිල්ෆර්ඩ්, MA, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය). ජංගම අවධිය 1.0 mL/min ප්රවාහ අනුපාතයකින් ජලයේ (B) ඇසිටොනයිට්රයිල් (A) සහ 0.1% ඇසිටික් අම්ලයෙන් සමන්විත විය. බහු-පියවර අනුක්රමික වැඩසටහනක් පහත පරිදි භාවිතා කරන ලදී: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min), සහ 20–65% A (23–40 min). හඳුනාගැනීමේ තරංග ආයාමය 210–400 nm හිදී ස්කෑන් කර 254 nm හිදී වාර්තා කරන ලදී. එන්නත් පරිමාව 10.0 විය.μL. ක්රෝමෝන තුනක් නිර්ණය කිරීම සඳහා සම්මත විසඳුම් 7.781 mg/mL අවසාන සාන්ද්රණයකින් සකස් කරන ලදී (ප්රාථමික-O-ග්ලූකෝසිල්සිමිෆුජින්), 31.125 mg/mL (4′-O-β-ඩී-ග්ලූකෝසිල්-5-O-මෙතිල්විසැමිනෝල්), සහ 31.125 mg/mL (තත්පර-O-ග්ලූකොසයිල්හමවුඩෝල්) මෙතනෝල් වල අඩංගු වන අතර 4°C උෂ්ණත්වයක තබා ඇත.
2.3. ප්රති-ගිනි අවුලුවන ක්රියාකාරකම් ඇගයීමවිට්රෝ තුළ
2.3.1. සෛල සංස්කෘතිය සහ සාම්පල ප්රතිකාරය
RAW සෛල 264.7 ඇමරිකානු වර්ග සංස්කෘතික එකතුවෙන් (ATCC, Manassas, VA, USA) ලබා ගත් අතර 1% ප්රතිජීවක සහ 5.5% FBS අඩංගු DMEM මාධ්යයෙන් වගා කරන ලදී. සෛල 37°C දී 5% CO2 ආර්ද්රිත වායුගෝලයක තැන්පත් කරන ලදී. සෛල උත්තේජනය කිරීම සඳහා, මාධ්යය නැවුම් DMEM මාධ්යයෙන් සහ ලිපොපොලිසැකරයිඩ (LPS, සිග්මා-ඇල්ඩ්රිච් කෙමිකල් සමාගම, ශාන්ත ලුවී, MO, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) 1 හි ප්රතිස්ථාපනය කරන ලදී.μSDE තිබීම හෝ නොමැති විට g/mL එකතු කරන ලදී (200 හෝ 400μg/mL) අමතර පැය 24ක් සඳහා.
2.3.2. නයිට්රික් ඔක්සයිඩ් (NO), ප්රොස්ටැග්ලැන්ඩින් E2 (PGE2), පිළිකා නෙරෝසිස් සාධකය නිර්ණය කිරීම-α(ටීඑන්එෆ්-α), සහ ඉන්ටර්ලියුකින්-6 (IL-6) නිෂ්පාදනය
සෛල SDE සමඟ ප්රතිකාර කර පැය 24ක් LPS සමඟ උත්තේජනය කරන ලදී. පෙර අධ්යයනයකට අනුව ග්රීස් ප්රතික්රියාකාරකය භාවිතයෙන් නයිට්රයිට් මැනීමෙන් කිසිදු නිෂ්පාදනයක් විශ්ලේෂණය කර නොමැත [12]. ගිනි අවුලුවන සයිටොකයින් PGE2, TNF- ස්රාවය කිරීම.α, සහ නිෂ්පාදක උපදෙස් අනුව ELISA කට්ටලයක් (R&D පද්ධති) භාවිතයෙන් IL-6 තීරණය කරන ලදී. Wallac EnVision භාවිතයෙන් NO සහ සයිටොකයින් නිෂ්පාදනය මත SDE හි බලපෑම් 540 nm හෝ 450 nm හිදී තීරණය කරන ලදී.™ කර්තෘ:ක්ෂුද්ර තහඩු කියවනය (පර්කින් එල්මර්).
2.4. ඔස්ටියෝ ආතරයිටිස් විරෝධී ක්රියාකාරිත්වය ඇගයීමසජීවීව
2.4.1. සතුන්
සති 7 ක් වයසැති පිරිමි ස්ප්රැග්-ඩෝලි මීයන්, කොරියාවේ ඔසාන් හි සැම්ටකෝ ඉන්කෝපරේෂන් වෙතින් මිලදී ගෙන පැය 12 ක ආලෝක/අඳුරු චක්රයක් සහිත පාලිත තත්වයන් යටතේ තබා ඇත.°C සහ% ආර්ද්රතාවය. මීයන්ට රසායනාගාර ආහාර සහ ජලය ලබා දෙන ලදී.නිදහසේ. සියලුම අත්හදා බැලීම් ක්රියා පටිපාටි ජාතික සෞඛ්ය ආයතන (NIH) මාර්ගෝපදේශයන්ට අනුකූලව සිදු කරන ලද අතර ඩේජියොන් විශ්ව විද්යාලයේ (ඩේජියොන්, කොරියානු ජනරජය) සත්ව රැකවරණය සහ භාවිතය පිළිබඳ කමිටුව විසින් අනුමත කරන ලදී.
2.4.2. මීයන් තුළ MIA සමඟ OA ප්රේරණය කිරීම
අධ්යයනය ආරම්භ කිරීමට පෙර සතුන් අහඹු ලෙස සකස් කර ප්රතිකාර කණ්ඩායම්වලට පවරන ලදී (කණ්ඩායමකට). MIA ද්රාවණය (3 mg/50μකෙටමයින් සහ සයිලසීන් මිශ්රණයකින් ප්රේරණය කරන ලද නිර්වින්දනය යටතේ දකුණු දණහිසේ අභ්යන්තර සන්ධි අවකාශයට 0.9% සේලයින් L) සෘජුවම එන්නත් කරන ලදී. මීයන් අහඹු ලෙස කණ්ඩායම් හතරකට බෙදා ඇත: (1) MIA එන්නත් නොකළ සේලයින් කණ්ඩායම, (2) MIA එන්නත් කළ MIA කණ්ඩායම, (3) MIA එන්නත් කළ SDE-ප්රතිකාර කළ කණ්ඩායම (200 mg/kg) සහ (4) MIA එන්නත් කළ ඉන්ඩොමෙතසින්- (IM-) ප්රතිකාර කළ කණ්ඩායම (2 mg/kg). MIA එන්නත් කිරීමට සතියකට පෙර සති 4 ක් සඳහා SDE සහ IM සමඟ මීයන්ට වාචිකව පරිපාලනය කරන ලදී. මෙම අධ්යයනයේදී භාවිතා කරන ලද SDE සහ IM මාත්රාව පෙර අධ්යයනයන්හි සේවය කළ අය මත පදනම් විය [10,13,14].
2.4.3. හින්ඩ්පෝ බර දරණ ව්යාප්තියේ මිනුම්
OA ප්රේරණයෙන් පසු, පසුපස පාදවල බර දරාගැනීමේ හැකියාවේ මුල් සමතුලිතතාවයට බාධා ඇති විය. බර දරාගැනීමේ ඉවසීමේ වෙනස්කම් ඇගයීම සඳහා අබලතා පරීක්ෂකයක් (ලින්ටන් උපකරණ, නොර්ෆොක්, එක්සත් රාජධානිය) භාවිතා කරන ලදී. මීයන් ප්රවේශමෙන් මිනුම් කුටියට ඇතුළත් කරන ලදී. පසුපස පාදය මගින් ක්රියාත්මක කරන ලද බර දරාගැනීමේ බලය තත්පර 3 ක කාලයක් තුළ සාමාන්යකරණය කරන ලදී. බර බෙදා හැරීමේ අනුපාතය පහත සමීකරණය මගින් ගණනය කරන ලදී: [දකුණු පසුපස පාදයේ බර/(දකුණු පසුපස පාදයේ බර + වම් පසුපස පාදයේ බර)] × 100 [15].
2.4.4. සෙරුම් සයිටොකයින් මට්ටම් මැනීම
රුධිර සාම්පල ග්රෑම් 1,500 කින් මිනිත්තු 10 ක් 4°C දී කේන්ද්රාපසාරී කරන ලදී; පසුව සෙරුමය එකතු කර භාවිතය තෙක් −70°C දී ගබඩා කරන ලදී. IL-1 මට්ටම්β, ඉල්-6, ටීඑන්එෆ්-α, සහ සෙරුමයේ PGE2 මනින ලද්දේ නිෂ්පාදකයාගේ උපදෙස් අනුව R&D පද්ධති (මිනියාපොලිස්, MN, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) වෙතින් ELISA කට්ටල භාවිතයෙන් ය.
2.4.5. තත්ය කාලීන ප්රමාණාත්මක RT-PCR විශ්ලේෂණය
TRI reagent® (සිග්මා-ඇල්ඩ්රිච්, ශාන්ත ලුවී, MO, ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) භාවිතයෙන් දණහිස් සන්ධි පටක වලින් සම්පූර්ණ RNA නිස්සාරණය කරන ලද අතර, SYBR කොළ (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) සහිත TM One Step RT PCR කට්ටලයක් භාවිතයෙන් cDNA සහ PCR-විස්තාරණය කරන ලද ප්රතිලෝම පිටපත් කරන ලදී. Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR පද්ධතිය (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) භාවිතයෙන් තත්ය කාලීන ප්රමාණාත්මක PCR සිදු කරන ලදී. ප්රාථමික අනුපිළිවෙල සහ පරීක්ෂණ අනුපිළිවෙල වගුවේ දක්වා ඇත.1. නිෂ්පාදක උපදෙස් වලට අනුව (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) DNA පොලිමරේස් අඩංගු TaqMan® Universal PCR මාස්ටර් මිශ්රණය සමඟ සාම්පල cDNA සහ GAPDH cDNA වල ඇල්කොහොල් ප්රමාණයක් විස්තාරණය කරන ලදී. PCR තත්වයන් 50°C දී මිනිත්තු 2 ක්, 94°C දී මිනිත්තු 10 ක්, 95°C දී තත්පර 15 ක් සහ චක්ර 40 ක් සඳහා 60°C දී මිනිත්තු 1 ක් විය. ඉලක්කගත ජානයේ සාන්ද්රණය නිෂ්පාදකයාගේ උපදෙස් වලට අනුව සංසන්දනාත්මක Ct (විස්තාරණ කුමන්ත්රණය සහ එළිපත්ත අතර හරස් ලක්ෂ්යයේ එළිපත්ත චක්ර අංකය) ක්රමය භාවිතයෙන් තීරණය කරන ලදී.
FOB මිල:ඇමරිකානු ඩොලර් 0.5 - 9,999 / කෑල්ලක් අවම ඇණවුම් ප්රමාණය:100 කෑලි/කෑලි සැපයුම් හැකියාව:මසකට කෑලි/කෑලි 10000ක්