ඉටිපන්දම් සහ සබන් සෑදීම සඳහා පිරිසිදු Saposhnikovia divaricata තෙල් තොග විසරණ අත්යවශ්ය තෙල් බට දාහක විසරණය සඳහා නව

ඉටිපන්දම් සහ සබන් සෑදීම සඳහා පිරිසිදු Saposhnikovia divaricata තෙල් තොග විසරණ අත්යවශ්ය තෙල් බට දාහක විසරණ සඳහා නව විශේෂාංග සහිත රූපය

කෙටි විස්තරය:

2.1 SDE සකස් කිරීම

SD හි ඉඟුරු, Hanherb Co. (Guri, Korea) වෙතින් වියලන ලද ඖෂධ පැළෑටියක් ලෙස මිල දී ගෙන ඇත. කොරියාවේ පෙරදිග වෛද්‍ය ආයතනයේ (KIOM) වෛද්‍ය ගෝ-යා චෝයි විසින් ශාක ද්‍රව්‍ය වර්ගීකරණයෙන් තහවුරු කරන ලදී. වවුචර් නියැදියක් (අංක 2014 SDE-6) සම්මත ඔසු සම්පත් කොරියානු ශාකාගාරයේ තැන්පත් කරන ලදී. SD (ග්‍රෑම් 320) වියළන ලද ඉඟුරු 70% එතනෝල් (පැය 2 ක ප්‍රත්‍යාවර්තයක් සහිත) සමඟ දෙවරක් නිස්සාරණය කරන ලද අතර පසුව සාරය අඩු පීඩනයක් යටතේ සාන්ද්‍රණය කරන ලදී. කසාය පෙරීම, lyophilized සහ 4 ° C දී ගබඩා කර ඇත. බොරතෙල් ආරම්භක ද්‍රව්‍ය වලින් වියලන ලද නිස්සාරණයේ අස්වැන්න 48.13% (w/w) විය.

2.2 ප්‍රමාණාත්මක ඉහළ ක්‍රියාකාරී ද්‍රව වර්ණදේහ (HPLC) විශ්ලේෂණය

HPLC පද්ධතියක් (Waters Co., Milford, MA, USA) සහ photodiode array අනාවරකයක් සමඟ වර්ණදේහ විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී. SDE හි HPLC විශ්ලේෂණය සඳහා, මූලික-O-glucosylcimifugin ප්‍රමිතිය සාම්ප්‍රදායික වෛද්‍ය කර්මාන්තය සඳහා කොරියානු ප්‍රවර්ධන ආයතනයෙන් (Gyeongsan, Korea) මිලදී ගන්නා ලදී, සහතත්පර-O-glucosylhamaudol සහ 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol අපගේ රසායනාගාරය තුළ හුදකලා කර ඇති අතර වර්ණාවලි විශ්ලේෂණයන් මගින් හඳුනාගෙන ඇත, මූලික වශයෙන් NMR සහ MS මගින්.

SDE සාම්පල (0.1 mg) 70% එතනෝල් (10 mL) තුළ දියවී ඇත. XSelect HSS T3 C18 තීරුවකින් (4.6 × 250 mm, 5) වර්ණදේහ වෙන් කිරීම සිදු කරන ලදී.μm, Waters Co., Milford, MA, USA). ජංගම අදියර ඇසිටොනිට්‍රයිල් (A) සහ 0.1% ඇසිටික් අම්ලය ජලයේ (B) 1.0 mL/min ප්‍රවාහ අනුපාතයකින් සමන්විත විය. බහු පියවර අනුක්‍රමික වැඩසටහනක් පහත පරිදි භාවිතා කරන ලදී: 5% A (මිනිත්තු 0), 5-20% A (විනාඩි 0-10), 20% A (විනාඩි 10-23), සහ 20-65% A (විනාඩි 23-40 ) හඳුනාගැනීමේ තරංග ආයාමය 210-400 nm හි පරිලෝකනය කරන ලද අතර 254 nm ලෙස සටහන් විය. එන්නත් පරිමාව 10.0 කිμL. ක්‍රෝමෝන තුනක් නිර්ණය කිරීම සඳහා සම්මත විසඳුම් 7.781 mg/mL අවසන් සාන්ද්‍රණයකින් සකස් කරන ලදී (prim-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-මෙතිල්විසම්මිනෝල්), සහ 31.125 mg/mL (තත්පර-O-glucosylhamaudol) මෙතනෝල් වල සහ 4 ° C දී තබා ඇත.

2.3 ප්රති-ගිනි අවුලුවන ක්රියාකාරිත්වය ඇගයීමVitro තුළ

2.3.1. සෛල සංස්කෘතිය සහ නියැදි ප්රතිකාර

RAW 264.7 සෛල ඇමරිකානු වර්ගයේ සංස්කෘතික එකතුවෙන් (ATCC, Manassas, VA, USA) ලබාගෙන 1% ප්‍රතිජීවක සහ 5.5% FBS අඩංගු DMEM මාධ්‍යයෙන් වගා කරන ලදී. 37 ° C දී 5% CO2 හි ආර්ද්‍රතා වායුගෝලය තුළ සෛල තැන්පත් කරන ලදී. සෛල උත්තේජනය කිරීම සඳහා, මාධ්‍යය නැවුම් DMEM මාධ්‍යයෙන් ප්‍රතිස්ථාපනය කරන ලද අතර, 1 ට lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ආදේශ කරන ලදී.μSDE (200 හෝ 400) තිබීම හෝ නොපැවතීමේදී g/mL එකතු කරන ලදීμg/mL) අමතර පැය 24ක් සඳහා.

2.3.2. නයිට්‍රික් ඔක්සයිඩ් (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor- නිර්ණය කිරීමα(TNF-α), සහ Interleukin-6 (IL-6) නිෂ්පාදනය

සෛල SDE සමඟ ප්‍රතිකාර කර පැය 24ක් LPS සමඟ උත්තේජනය කරන ලදී. පෙර අධ්‍යයනයකට අනුව ග්‍රීස් ප්‍රතික්‍රියාකාරකය භාවිතයෙන් නයිට්‍රයිට් මැනීම මගින් කිසිදු නිෂ්පාදනයක් විශ්ලේෂණය කර නොමැත.12]. PGE2, TNF- ගිනි අවුලුවන සයිටොකයින් ස්‍රාවය කිරීමα, සහ නිෂ්පාදක උපදෙස් අනුව ELISA කට්ටලයක් (R&D පද්ධති) භාවිතයෙන් IL-6 තීරණය කරන ලදී. NO සහ සයිටොකයින් නිෂ්පාදනය මත SDE හි බලපෑම් Wallac EnVision භාවිතයෙන් 540 nm හෝ 450 nm දී තීරණය කරන ලදී.™මයික්‍රොප්ලේට් රීඩර් (පර්කින්එල්මර්).

2.4 Antiosteoarthritis ක්රියාකාරිත්වය ඇගයීමVivo හි

2.4.1. සතුන්

පිරිමි Sprague-Dawley මීයන් (සති 7ක් පැරණි) Samtako Inc. (Osan, Korea) වෙතින් මිල දී ගෙන පැය 12ක ආලෝක/අඳුරු චක්‍රයක් සහිත පාලන තත්ව යටතේ තබා ඇත.°C සහ% ආර්ද්රතාවය. මීයන්ට රසායනාගාර ආහාර සහ ජලය ලබා දෙන ලදීad libitum. සියලුම පර්යේෂණාත්මක ක්‍රියා පටිපාටි ජාතික සෞඛ්‍ය ආයතන (NIH) මාර්ගෝපදේශයන්ට අනුකූලව සිදු කරන ලද අතර ඩේජියොන් විශ්ව විද්‍යාලයේ (ඩේජියොන්, කොරියානු ජනරජයේ) සත්ව ආරක්ෂණ සහ භාවිත කමිටුව විසින් අනුමත කරන ලදී.

2.4.2. මීයන් තුළ MIA සමඟ OA ප්‍රේරණය කිරීම

අධ්‍යයනය ආරම්භ කිරීමට පෙර සතුන් අහඹු ලෙස සකස් කර ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම් වෙත පවරා ඇත (කණ්ඩායමකට). MIA ද්‍රාවණය (3 mg/50μ0.9% සේලයින් L) කෙටමින් සහ සයිලාසීන් මිශ්‍රණයකින් ප්‍රේරණය කරන ලද නිර්වින්දනය යටතේ දකුණු දණහිසේ අභ්‍යන්තර සන්ධි අවකාශයට කෙලින්ම එන්නත් කරන ලදී. මීයන් අහඹු ලෙස කණ්ඩායම් හතරකට බෙදා ඇත: (1) MIA එන්නත් නොමැති සේලයින් කාණ්ඩය, (2) MIA එන්නත් සහිත MIA කාණ්ඩය, (3) SDE-ප්‍රතිකාර කළ කණ්ඩායම (200 mg/kg) MIA එන්නත් සමඟ, සහ (4 ) MIA එන්නත් සමඟ indomethacin- (IM-) ප්‍රතිකාර කළ කණ්ඩායම (2 mg/kg). සති 4 ක් සඳහා MIA එන්නත් කිරීමට සතියකට පෙර මීයන් SDE සහ IM සමඟ වාචිකව පරිපාලනය කරන ලදී. මෙම අධ්‍යයනයේ දී භාවිතා කරන ලද SDE සහ IM මාත්‍රාව පෙර අධ්‍යයනයන්හි යෙදී සිටි අය මත පදනම් විය.10,13,14].

2.4.3. Hindpaw බර උසුලන බෙදා හැරීමේ මිනුම්

OA ප්‍රේරණයෙන් පසුව, පසුපස පාදවල බර ඉසිලීමේ හැකියාවේ මුල් ශේෂය කඩාකප්පල් විය. බර උසුලන ඉවසීමේ වෙනස්කම් ඇගයීම සඳහා අකාර්යක්ෂමතා පරීක්ෂක (ලින්ටන් උපකරණ, නොර්ෆොක්, එක්සත් රාජධානිය) භාවිතා කරන ලදී. මීයන් ප්‍රවේශමෙන් මිනුම් කුටියට දමා ඇත. පසුපස පාදයේ බර දරා ගැනීමේ බලය තත්පර 3 ක කාලයක් තුළ සාමාන්‍ය විය. බර බෙදා හැරීමේ අනුපාතය පහත සමීකරණය මගින් ගණනය කරන ලදී: [දකුණු පසුපස පාදයේ බර/(දකුණුපස පසුපස අතේ බර + වම් පසුපස පාදයේ බර)] × 100 [15].

2.4.4. සෙරුම් සයිටොකයින් මට්ටම් මැනීම

රුධිර සාම්පල 4 ° C දී විනාඩි 10 ක් සඳහා ග්රෑම් 1,500 ට කේන්ද්රාපසාරී කර ඇත; පසුව සෙරුමය එකතු කර භාවිතා කරන තෙක් −70 ° C දී ගබඩා කර ඇත. IL-1 මට්ටම්β, IL-6, TNF-α, සහ සෙරුමයේ PGE2 නිෂ්පාදක උපදෙස් අනුව R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) වෙතින් ELISA කට්ටල භාවිතයෙන් මනිනු ලැබේ.

2.4.5 තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක RT-PCR විශ්ලේෂණය

TRI ප්‍රතික්‍රියාකාරකය (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) භාවිතයෙන් දණහිස් සන්ධි පටක වලින් සම්පූර්ණ RNA නිස්සාරණය කර, cDNA වෙත ප්‍රතිලෝමව පිටපත් කර, SYBR කොළ (ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති සහිත TM One Step RT PCR කට්ටලයක් භාවිතයෙන් PCR-විස්තාරණය කරන ලදී. , Grand Island, NY, USA). ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති 7500 තත්‍ය කාලීන PCR පද්ධතිය භාවිතයෙන් තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR සිදු කරන ලදී (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). ප්‍රාථමික අනුපිළිවෙල සහ පරීක්ෂණ අනුපිළිවෙල වගුවේ දක්වා ඇත1. නිෂ්පාදක උපදෙස් අනුව (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) DNA පොලිමරේස් අඩංගු TaqMan® Universal PCR ප්‍රධාන මිශ්‍රණයෙන් නියැදි cDNA වල ඇල්කොට් සහ GAPDH cDNA සමාන ප්‍රමාණයක් විස්තාරණය කරන ලදී. PCR තත්වයන් 50 ° C දී මිනිත්තු 2 ක්, 94 ° C දී විනාඩි 10 ක්, 95 ° C දී තත්පර 15 ක් සහ චක්ර 40 ක් සඳහා 60 ° C දී විනාඩි 1 ක් විය. ඉලක්ක ජානයේ සාන්ද්‍රණය නිෂ්පාදකයාගේ උපදෙස් අනුව සංසන්දනාත්මක Ct (වර්ධක කුමන්ත්‍රණය සහ එළිපත්ත අතර හරස් ලක්ෂ්‍යයේ එළිපත්ත චක්‍ර අංකය) ක්‍රමය භාවිතා කර තීරණය කරන ලදී.

FOB මිල:US $0.5 - 9,999 / කෑල්ලක්

අවම ඇණවුම් ප්‍රමාණය:100 කෑලි/කෑලි

සැපයුම් හැකියාව:මසකට 10000 කෑලි/කෑලි

අපට විද්‍යුත් තැපෑල එවන්න

නිෂ්පාදන විස්තර

නිෂ්පාදන ටැග්

ඔස්ටියෝ ආතරයිටිස් (OA) යනු වඩාත් සුලභ මස්කියුෙලොස්ෙකලටල් ආබාධයක් වන අතර වැඩිහිටියන්ගේ වඩාත් සුලභ පරිහානීය සන්ධි රෝගයකි.1]. OA යනු තුවාල, කාටිලේජ ව්‍යුහය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය නැතිවීම සහ ප්‍රෝගිනි අවුලුවන සහ ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන මාර්ග අක්‍රිය වීම නිසා ඇති වන තත්වයකි.2,3]. එය මූලික වශයෙන් සයිනෝවියල් සන්ධිවල සන්ධි කාටිලේජ සහ උපකොන්ඩ්‍රල් අස්ථි වලට බලපාන අතර සන්ධි අසාර්ථක වීමට හේතු වන අතර ඇවිදීම සහ සිටගෙන සිටීම ඇතුළුව බර උසුලන විට වේදනාව ඇති කරයි.4].

කාටිලේජ විනාශ වූ පසු නැවත යථා තත්ත්වයට පත් කිරීම ඉතා අපහසු බැවින් OA සඳහා ප්‍රතිකාරයක් නොමැත.5]. ප්‍රතිකාරයේ අරමුණු වන්නේ වේදනාව සමනය කිරීම, සන්ධි සංචලනය පවත්වා ගැනීම හෝ වැඩිදියුණු කිරීම, සන්ධිවල ශක්තිය වැඩි කිරීම සහ රෝගයේ ආබාධිත බලපෑම් අවම කිරීමයි. OA හි ඖෂධීය ප්රතිකාර මගින් රෝගියාගේ සන්ධි ක්රියාකාරිත්වය සහ ජීවන තත්ත්වය වැඩි කිරීම සඳහා වේදනාව අඩු කිරීම අරමුණු කරයි. OA හි ප්‍රධාන සිදුවීම කාටිලේජ විනාශය වුවද, කොලජන් ක්ෂය වීම ප්‍රදාහය සමඟ සම්බන්ධව OA හි ආපසු හැරවිය නොහැකි ප්‍රගතිය තීරණය කරන මූලික සිදුවීමයි.6,7]. ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන සහ chondroprotective ක්‍රියාකාරකම් සහිත ප්‍රතිකාර මගින් OA රෝගීන් තුළ වේදනාව සමනය කිරීමට සහ අනුකෘති අඛණ්ඩතාව පවත්වා ගැනීමට අපේක්ෂා කෙරේ.

එබැවින්, දැවිල්ල අඩු කිරීම OA කළමනාකරණයට ප්‍රයෝජනවත් වනු ඇත. මෑත අධ්‍යයනයන් මගින් සන්ධි ආශ්‍රිත පටක සමඟ අන්තර් ක්‍රියා කිරීමට ඇති හැකියාව හරහා කොන්ඩ්‍රොසයිට් දැවිල්ල සහ තවදුරටත් කාටිලේජ විනාශය අවම කිරීම සම්බන්ධයෙන් OA හි ප්‍රගතිය මත ශාකසාර සම්පත් සඳහා ආරක්ෂිත භූමිකාවන් යෝජනා කරයි.8].

මූලයSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) කොරියාවේ සහ චීනයේ හිසරදය, වේදනාව, දැවිල්ල සහ ආතරයිටිස් සඳහා සාම්ප්‍රදායික වෛද්‍ය විද්‍යාවේ බහුලව භාවිතා වේ.9,10]. විවිධ ඖෂධීය බලපෑම්Saposhnikovia divaricata(SD) ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන, වේදනා නාශක, ප්‍රති-ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන සහ ප්‍රති-ආතරයිටිස් ගුණ ද ඇතුළත් වේ.9,11]. මෑත අධ්‍යයනයකින් පෙන්නුම් කළේ SD ක්‍රෝමෝන සාරය කොලජන් ප්‍රේරිත ආතරයිටිස් වල මූසික ආකෘතියක විභව ප්‍රති-රූමැටොයිඩ් ආතරයිටිස් බලපෑම් ඇති බවයි.10]; කෙසේ වෙතත්, ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන සහ ප්‍රති-ආතරයිටිස් ක්‍රියාකාරකම් සඳහා සහාය වීම සඳහා අධ්‍යයනයන් කිහිපයක් සිදු කර ඇතSaposhnikovia divaricataඋපුටා ගැනීම (SDE).

එබැවින්, වර්තමාන අධ්‍යයනයෙන් SD හි 70% එතනෝල් සාරයක ප්‍රති-ගිනි අවුලුවන සහ ප්‍රති-ඔස්ටියෝ ආතරයිටිස් ක්‍රියාකාරකම් විමර්ශනය කරන ලදී. පළමුව, SDE හි ප්රති-ගිනි අවුලුවන බලපෑම ඇගයීමට ලක් වියin vitroLPS-ප්‍රේරිත RAW 264.7 සෛල තුළ. මීලඟට, SDE හි ප්‍රති-ඔස්ටියෝ ආතරයිටිස් බලපෑම මනිනු ලැබුවේ මොනොසෝඩියම් අයඩෝඇසිටේට්- (MIA-) ප්‍රේරිත OA හි මී ආකෘතියක බර දරන ව්‍යාප්තිය, සන්ධි කාටිලේජ පිරිහීම සහ ගිනි අවුලුවන ප්‍රතිචාර තක්සේරු කිරීමෙනි.